hCov-HKU1-N Pseudovirus Standard Reference

hCov-HKU1于2005年在香港发现，是上呼吸道和下呼吸道自限性感染的常见原因，最常见于幼儿。没有实验室诊断，通常通过呼吸道样品的逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），HCoV-HKU1呼吸道感染无法与其他呼吸道病毒引起的感染区分开。治疗应具有症状且符合支持病毒性呼吸道感染的一般指南。

根据CDC和WHO的介绍，针对 hCov-HKU1的核酸诊断一般是针对RdRP (RNA-dependent RNA polymerase)、Gene N和Gene E， Gene S更多用于对应药物和疫苗的开发。NCBI收录序列为KF686346，全长29982，基因编码5个结构蛋白：S，M，N，HE和E。

以往针对试剂盒检测限的性能评价，一般是选择体外转录的RNA、或者临床阳性病毒来作为标准品，用于性能评价。但是两者都具有很明显的确定，首先体外转录的RNA，一般是很纯，单一，不涉及提取，不符合临床病毒的微环境，因此必然造成检测灵敏度被高估，这也是存在高概率假阴性的主要原因；再次临床阳性病毒，即使是灭活的病毒，也是存在很大的生物安全隐患，因此要求实验室级别为P3-P4，大部分开发诊断试剂盒单位都不满足改要求，另外临床阳性病毒也是来源很有限，不能被稳定供应，反复用于试剂盒的性能评价。

有病毒的完整包膜结构，有HCoV-HKU1对应的核酸序列，但是生物安全风险较低的假病毒标准品，完美的克服了选择体外转录的RNA、或者临床阳性病毒来作为标准品的缺点，非常适合用于核酸诊断性能评价的标准品。

构建过程：HCoV-HKU1基因合成→假病毒包装→纯化→QC检测（ddPCR）

Gene N(1326bp)

• 根据HCoV-HKU1冠状病毒的特点，选取了ORF1ab/RdRP（RNA-dependent RNA polymerase）、Gene E(envelope protein)、Gene N(nucleocapsid phosphoprotein)合计3个区段的序列，用于假病毒的包装，3个区段很好的表征了HCoV-HKU1的特征序列；

• 科佰生物设计了ddPCR体系的引物、探针序列，可不需要构建标准曲线的前提下完成对假病毒的QC拷贝数检测，非常准确表征标准品的拷贝数，而且克服了Q-PCR分析CT值的相对判断标准的不准确性；

• 假病毒标准品，无致病性，可再生，质控方法可靠，批次间稳定，可以长期稳定制备和供应，而且要求实验室生物安全级别为P2，满足很多单位的安全需求。

Gene N:

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